細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。

利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。

既可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，又起到了細胞保種的作用。

在不附加任何保護劑下直接凍存細胞時，細胞內和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH 改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。

因此，凍存時，應向培養(yǎng)液中加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水分在凍結前透出細胞。貯存在液氮中能減少冰晶的形成。

實驗開始前，要先做好準備工作：

將凍存管、離心管、移液管、移液器等耗材準備齊全，放入超凈臺中，打開紫外線照射 30 分鐘。打開通風機通風 3 分鐘。用 75%酒精擦拭操作臺和雙手。準備好冰盒。

將離心機調節(jié)至所需轉速，細胞*培養(yǎng)基、DMSO、胰酶等放于37℃水浴箱中預熱。

凍存步驟：

1、取出細胞，酒精消毒，放入超凈臺。

Tip1：應在細胞生長良好、致密度約為 80-90％，活力達 90%以上的狀態(tài)下凍存。細胞活力差的細胞在凍存后的成活率很小，因此，一定要在細胞旺盛分裂時期凍存。

2、配置細胞凍存液：按無血清培養(yǎng)基：血清 ：DMSO=7:2:1 的比例配置細胞凍存液。

Tip2：DMSO 應為試劑級等級，無菌且無色，可以用 0.22 微米濾膜過濾，或者直接購買無菌產品。以 5-10 ml 小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。

Tip3：因DMSO 本身就有滅菌的作用，因此使用前不需要進行高壓滅菌。高壓滅菌反而會破壞它的分子結構，以至于降低冷凍保存效果。

Tip4：在常溫下，DMSO 對人體有害，應注意生物安全防護。

Tip5：凍存液應該提前配制，防止臨時配制產生的熱量損傷細胞。

Tip6：加大凍存液中血清的比例對于保存某些脆弱的干細胞以及一些比較珍貴的細胞很有好處的。

3、按照細胞傳代步驟，對細胞進行消化、解離。

4、消化好的細胞離心后，棄掉上清液，用凍存液重懸。

Tip7：用移液器吸去上清液時，不要吸到底部的細胞沉淀。

Tip8：用移液器輕柔吹打細胞，避免損傷細胞。

Tip9：混勻 DMSO 要快，因為 DMSO 對細胞有毒性，混合后應盡快凍存。

5、可用細胞計數板或計數儀器對細胞進行計數，將細胞總數調節(jié)至細胞數量為5×10?個/ml為宜。

6、將細胞凍存懸液分裝入細胞凍存管中，一般2ml凍存管裝入 1 -1.5 ml細胞凍存懸液為宜。

7、放入專業(yè)的細胞凍存盒中，或者按照：

﹣4 ℃ 30 分鐘→20 ℃ 30 分鐘→﹣80 ℃過夜→液氮保存的順序進行凍存。

Tip10：復蘇遵循快速解凍的原則，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。而細胞凍存則要緩慢冷凍，目的是使細胞逐步脫水，細胞內不致產生大的冰晶從而降低對細胞的傷害。

對于大多數細胞來說，每分鐘降 1-3℃是合適的。

優(yōu)質的胎牛血清

Ausbian

剛剛有提到，在細胞凍存過程中，適當提高血清的比例，更有利于提高對脆弱細胞的保護。

血清不僅提供營養(yǎng)上的支持，作為細胞生長的媒介之一，其品質優(yōu)劣，直接影響細胞的長勢，從而影響實驗結果的產出。

因此，挑選一款品質優(yōu)異的血清尤為重要。Ausbian進口特級胎牛血清，采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血，出廠前均經過嚴格質控，并附詳細《檢測報告》，如pH值、滲透壓、內毒素、病毒檢測、促細胞生長能力、無菌等檢查，均有詳細說明。

Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有*優(yōu)勢：

1. 精選內毒素更低批次（≤3EU/ml），原裝jin口。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應品牌。

2. 新批次在試用前，提供試用服務，養(yǎng)細胞更放心。

3. 每個批次產量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數項目兩年不需換批次，細胞試驗數據穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產順序，會有多批次平行供應，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面，提供更多免費延伸性技術幫助）。

6. 針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發(fā)貨。

8. Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復凍融。

9. 免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10. 免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 免費專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養(yǎng)經驗，為各種細胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考。

12. Ausbian品牌擁有全系列血清產品線：

特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清（貨號：WS500T(紅點)），透析胎牛血清 （貨號：VS500TZ ）等多系列產品，服務更專業(yè)更精準。